〔摘　要〕 目的 构建稳定表达重组人凝血因子Ⅶ（rhFⅦ）的单克隆人胚胎肾293细胞株（HEK293），评估其rhFⅦ表达量及促凝血生物活性。方法 重组质粒pcDNA3.1-EGFP-FⅦ转染HEK293细胞，验证转染系统的有效性。重组质粒pcDNA3.1-FⅦ转染HEK293细胞，遗传霉素（G418）筛选单克隆稳定转染细胞株，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）鉴定FⅦ基因的转录，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot检测单克隆稳定转染细胞株上清液中的rhFⅦ表达水平。酶联免疫吸附（ELISA）实验测定rhFⅦ浓度，人凝血因子Ⅶ效价法测定rhFⅦ的促凝血活性。结果 转染pcDNA3.1-EGFP-FⅦ的HEK293细胞呈现绿色荧光，pcDNA3.1-FⅦ瞬时转染HEK293细胞后成功表达rhFⅦ。筛选得到单克隆稳定转染细胞株，FⅦ基因整合至单克隆稳定转染细胞株基因组，细胞活力良好，细胞上清液纯化后获得rhFⅦ单一条带。rhFⅦ表达量最高为（1.27±0.09）mg/L，促凝血活性最高为（380.29±13.80）%。结论 筛选获得的单克隆HEK293细胞株，能够高效、稳定表达具备优良促凝血生物活性的rhFⅦ蛋白，为该类药物的研发奠定基础。