基金项目: 安徽省高校学科(专业)拔尖人才学术资助项目(编号:gxbjZD2021046)~~
作者:赵韦;徐德苹;廖开楠;蔡春林;臧丹丹;周海胜;
关键词:足细胞;氨氯地平; 血管紧张素Ⅱ; 自噬; Ca~(2+); 细胞凋亡;
DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2025.07.003
〔摘 要〕 目的 探究降血压药物氨氯地平对足细胞内 Ca2 + 内流及其自噬的影响。方法 体外常规培养永生化的人足细胞( HPC) ,使用血管紧张素 Ⅱ (Ang Ⅱ) 以及 L 型 Ca2 + 阻断剂氨氯地平单独或者联合处理 HPC 细胞,Ca2 + 成像系统实时检测药物处理后 HPC 细胞内 Ca2 + 通量的瞬时变化 ; Western blot 法检测自噬标志蛋白 LC3B-Ⅱ/ LC3B-Ⅰ 比值变化、Beclin-1、P62 和凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax 的表达水平 ; 流式细胞术检测 488 nm 处 Fluo-4AM 的阳性细胞数以分析 HPC 细胞内 Ca2 + 内流水平 ; Ly- so-Tracker Green 活细胞染色分析溶酶体荧光强度 ; 流式细胞术检测 HPC 细胞凋亡率。结果 与对照组比较,Ang Ⅱ组 Ca2 + 瞬时通量和 Fluo-4AM 阳性细胞数显著增加 (P<0. 001) 、自噬标志蛋白 LC3B-Ⅱ/ LC3B-Ⅰ 比值(P<0. 001) 和 Beclin-1 的蛋白表达(P<0. 01) 均降低、P62 的表达升高(P<0. 01) 、溶酶体荧光强度减弱 (P<0. 05) 、细胞凋亡率升高(P<0. 000 1) 、凋亡相关蛋白 Bcl-2 表达降低(P<0. 01) 、Bax 蛋白升高(P<0. 001) 。与对照组比较,氨氯地平组 Fluo-4AM 阳性细胞数显著降低 (P < 0. 001) 、LC3B-Ⅱ / LC3B-Ⅰ 比值(P<0. 001) 和 Beclin-1 的蛋白表达(P<0. 001) 均升高、P62 蛋白表达降低(P<0. 05) 、溶酶体荧光强度增强(P<0. 01) 、细胞凋亡率降低 (P<0. 01) 、Bcl-2 蛋白表达升高(P<0. 001) 、Bax 蛋白降低 (P <0. 001) 。与 Ang Ⅱ组比较,Ang Ⅱ + 氨氯地平组 Fluo-4AM 阳性细胞数显著降低 (P<0. 001) 、LC3B-Ⅱ/ LC3B-Ⅰ 比值(P <0. 01) 以及 Beclin-1的蛋白表达升高(P<0. 05) 、P62 蛋白降低 (P<0. 01) 、溶酶体荧光强度增加 (P<0. 05) 、细胞凋亡率降低 (P <0. 001) 、Bcl-2蛋白表达升高(P<0. 001) 、Bax 蛋白表达降低(P<0. 001) 。结论 氨氯地平抑制足细胞内 Ca2 + 内流,促进足细胞自噬、抑制凋亡,对于预防高血压肾病发生具有一定的作用。