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PDX1真核表达载体的构建及其对PANC-1细胞PI3K/AKT信号途径的影响

安徽医科大学学报 2017 02 v.52 186-189     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:81271748)

作者:栾康;金锐;刘莉;罗欣;张胜权;

关键词:PDX1;;基因重组;;PI3K/AKT信号通路;;PANC-1

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2017.02.007

〔摘 要〕 目的构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX1)基因真核表达载体并转染至PANC-1细胞,观察其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法从Hela细胞中提取总RNA,逆转后PCR扩增PDX1编码区片段,然后将PDX1的CDS插入PCMV6-Entry质粒构建PCMV6-Entry-PDX1表达重组体。重组体转染至PANC-1细胞中通过G418筛选出稳定表达细胞株。Western blot分析PDX1蛋白水平表达及p-AKT水平变化。结果 PDX1基因成功在PANC-1中表达。利用Western blot检测验证获得了稳定的PDX1过表达细胞株。Western blot结果显示:过表达PDX1的细胞株AKT表达含量与正常细胞及对照细胞没有区别而p-AKT水平降低。结论PDX1基因过表达能够降低PANC-1细胞的p-AKT水平。