基金项目: 安徽医科大学“抗炎免疫药物教育部重点实验室”开放研究基金重点项目(编号:KFJJ-2021-04)；安徽省学术和技术带头人及后备人选科研活动经费资助项目(编号:2022H291)；安徽省转化医学研究院科研基金项目(编号:2023zhyx-C24)； 安徽医科大学横向课题经费资助项目(编号:2023009)；
作者：任俏慧;朱欣悦;吕伟;臧艳;王莲子;周心怡;姚骏骁;李涛
关键词：伊利司莫-铜离子;肝细胞癌;铜死亡;增殖;迁移;
DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2025.08.015
〔摘 要〕 目的 研究伊利司莫-铜离子(ES+Cu2+)对人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7的增殖抑制作用及其诱导铜死亡的潜力。方法 体外培养人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7细胞,分别施以ES溶液、Cu2+溶液和铜螯合剂四硫代钼酸铵（ATTM）溶液的单独或联合处理。采用CCK-8试剂盒评估ES+Cu2+对人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7细胞存活率的影响,以及铜螯合剂ATTM预处理后ES+Cu2+对细胞存活率的作用。流式细胞术检测ES+Cu2+诱导的细胞死亡情况及经铜螯合剂ATTM预处理后ES+Cu2+诱导细胞死亡的变化。Western blot检测ES+Cu2+诱导后细胞铜死亡相关蛋白ATP酶铜转运β（ATP7B）、铁氧还蛋白1 （FDX1）、二氢硫辛酰胺S-乙酰转移酶（DLAT）、超氧化物歧化酶1 （SOD1）的表达情况及经铜螯合剂ATTM预处理后ES+Cu2+对铜死亡相关蛋白表达的影响。细胞划痕实验检测ES+Cu2+对细胞增殖能力的影响及ATTM预处理后的逆转效应。结果 ES+Cu2+对人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7的毒性呈现显著的剂量依赖性（P<0.05）。ES和Cu2+联合应用相较于单独使用ES或者Cu2+对肝癌细胞的抑制效果更为显著（P<0.05）,而铜螯合剂ATTM能够逆转ES+Cu2+对细胞增殖的抑制效应（P<0.05）。流式结果显示,与对照组相比,ES+Cu2+处理后加重人肝癌细胞系PLC/PRF/5和Huh-7的细胞毒活性,而ATTM干预后较ES+Cu2+处理组细胞的毒活性减轻（P<0.05）。细胞划痕实验结果表明,ES+Cu2+处理后PLC/PRF/5和Huh-7细胞的迁移能力降低,而ATTM的加入逆转了ES+Cu2+对细胞迁移的抑制作用（P<0.05）。与对照组相比,ES+Cu2+处理后铜死亡相关蛋白ATP7B、FDX1、DLAT和SOD1的表达水平均有所下降,而ATTM的加入逆转了这些蛋白表达的变化趋势（P<0.05）。结论 ES与Cu2+的联合应用能够有效抑制肝癌细胞PLC/PRF/5和Huh-7的增殖和迁移能力,并诱导铜死亡,为肝细胞癌的治疗提供了新的策略。