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ARMET的原核表达及其单克隆抗体的制备

安徽医科大学学报 2009 06 v.44 665-669     字体:

基金项目: 国家自然科学基金(编号:30572219,30772557,30870881,230032);; 安徽省科技攻关项目(编号:07010300191)

作者:王法财;王海萍;李琪;方圣云;沈玉先;

关键词:抗体;;单克隆/分离和提纯

DOI:10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2009.06.002

〔摘 要〕 目的制备抗人ARMET(arginine-rich,mutated in early stage of tumors)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法将pET28a-ARMET转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,用预装好的Ni-beads柱进行纯化,通过SDS-PAGE电泳及考玛斯亮蓝染色方法判断融合蛋白的表达量及纯度。将纯化的ARMET免疫雌性BALB/c小鼠后采用淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌抗ARMET杂交瘤细胞株。体内诱生腹水法制备mAb,间接ELISA法测定其效价及抗体亚型,辛酸-硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb。用免疫荧光双标及Western blot法对抗体的特异性进行了鉴定。结果获得了纯度较高、浓度较高的融合蛋白;建立了7株稳定分泌特异性抗ARMET mAb的杂交瘤细胞株,诱生腹水法获得的抗体效价在1×10-5~1×10-7之间,且均有较好的特异性。结论已成功制备出抗ARMET mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究奠定了基础。